Este estudio examinó los cambios en la actividad enzimática del suelo causados por la fertilización mineral constante con NPK y la fertilización diversificada con micronutrientes Fe y Mo. Un experimento de campo se llevó a cabo en un diseño completamente aleatorio con cuatro repeticiones en Siedlce (centro-este de Polonia) entre 2012 y 2014. La alfalfa ( L.) se utilizó como planta de prueba. El primer factor consistió en tratamientos de fertilización: control; NPK; NPKFe1; NPKMo1; NPKFe1Mo1; NPKFe2; NPKMo2, y NPKFe2Mo2. El segundo factor estaba compuesto por el momento de muestreo del suelo (15 de agosto de 2012, 20 de septiembre de 2012, 17 de junio de 2013 y 20 de julio de 2014). Se aplicó fertilización mineral: N-20; P-22; K-124.5; Fe1-0.5; Mo1-0.5; Fe2-1.0; Mo2-1.0 kg ha. La aplicación de molibdeno (Mo2-1.0 kg ha) en alfalfa fertilizada con NPK fue óptima para obtener la actividad beneficiosa de la nitrogenasa. La fertilización aplicada NPKFe1Mo1 en el cultivo de alfalfa se optimizó para lograr una alta actividad de deshidrogenasas, actividad de fosfatasa alcalina y actividad de fosfatasa ácida. La actividad más alta de ureasa del suelo se determinó en el suelo fertilizado con NPKFe2Mo2. El índice bioquímico (BCHI) de fertilidad del suelo alcanzó su valor medio más alto (254.9) después de aplicar el NPKFe1Mo1. Un índice de fertilidad del suelo BCHI alto indica la posibilidad de generar altos rendimientos de alfalfa y mantener una buena cultura del suelo.