La levadura de cerveza seca se explora cada vez más como un ingrediente funcional en las dietas caninas, aunque la variabilidad del producto puede llevar a resultados diferentes. Este experimento evaluó las características de fermentación in vitro de diferentes fibras utilizando inóculos fecales de perros alimentados con dietas suplementadas con levadura de cerveza seca. El inóculo fecal para el ensayo de fermentación in vitro se obtuvo de perros adultos sanos alimentados con una dieta de control sin levadura (CTRL) o una dieta que contenía levadura de cerveza seca (BY). La pulpa de remolacha, la pectina y la celulosa se incubaron durante 0, 6, 12 o 18 horas, con mediciones de pH, producción de ácidos grasos de cadena corta (AGCC) y microbiota evaluadas en cada punto temporal. Las características de fermentación y las poblaciones microbianas diferían según la fibra y la fuente de inóculo. La pectina fue la más fermentable, la pulpa de remolacha tuvo una fermentabilidad moderada y la celulosa tuvo una fermentación mínima basada en la producción de AGCC y los cambios de pH. A las 18 horas, los inóculos BY produjeron más AGCC y un pH más bajo que CTRL, con la mayor diferencia de AGCC en la pulpa de remolacha (3549 vs. 2980 mol/g) y la mayor diferencia de pH en la pectina (-1.66 vs. -1.54). También se observaron diferencias en las abundancias relativas de los géneros bacterianos predominantes entre las fuentes de inóculo. Estos resultados indican que la suplementación con levadura de cerveza seca puede cambiar la abundancia y la actividad de la microbiota fecal canina in vitro.