La composición de ácidos grasos de la leche ha ganado el interés tanto de los fabricantes como de los consumidores en los últimos años. El presente trabajo tuvo como objetivo realizar un análisis de la concentración de C14:0, C16:0, C18:0, C18:1, ácidos grasos saturados (AGS), ácidos grasos monoinsaturados (AGMI), ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) y ácidos grasos de cadena corta (AGCC) en la leche de vaca en relación con el tipo de ración, la paridad, la fase de lactancia y la temporada. La leche de vaca de animales alimentados con raciones mezcladas totales, que incluyen silo de maíz, tenía concentraciones más altas de C14:0, C16:0 y AGS que aquellos alimentados con raciones basadas en pasto, pero concentraciones más bajas de C18:0 y AGPI. En comparación con las vacas de 1ª paridad, los animales de 2ª y 3ª paridad tenían concentraciones más altas de AGS y AGCC en la leche. Con respecto a la primavera, las concentraciones de C14:0, C16:0 y AGS aumentaron en verano, otoño e invierno, mientras que las concentraciones de AGMI, AGPI y AGCC disminuyeron. Considerando la fase de lactancia, las concentraciones de C14:0, C16:0 y AGS disminuyeron en vacas frescas con cetosis en comparación con vacas frescas sanas y aumentaron en el pico, la mitad y el final de la lactancia. C18:0, C18:1 y AGMI siguen la tendencia opuesta. El perfil de ácidos grasos de la leche varía significativamente a través de los efectos estudiados. El hecho de que el perfil de ácidos grasos esté asociado con la salud animal, las propiedades organolépticas de la leche o incluso la producción de metano resalta la importancia de estudiar los factores que afectan su variación.