(1) Antecedentes: La lesión del cartílago de la rodilla es una de las principales preocupaciones entre los pacientes con trastornos óseos y articulares. La implantación de condrocitos autólogos (ACI) se utiliza ampliamente para abordar la deterioración del cartílago de la rodilla. La integración de condrocitos autólogos y parches periostales ayuda a formar un nuevo tejido similar al cartílago en el área de la lesión. Este estudio utiliza una nueva fuente celular de cartílago porcino de un día de edad para fabricar una biomembrana como sustituto de las membranas periostales en técnicas de implantación celular para tratar lesiones del cartílago de la rodilla. (2) Métodos: Se identificaron y evaluaron las células aisladas del tejido de cartílago porcino de un día de edad por su capacidad de proliferación, capacidad de diferenciación y potencial de formación de membranas. El componente proteico de la biomembrana también se definió mediante proteómica. La capacidad de reparación del cartílago también se confirmó utilizando un modelo de trasplante in vitro. (3) Resultados: Los resultados negativos para enfermedades infecciosas porcinas son fundamentales para seleccionar lechones adecuados que proporcionen tejido cartilaginoso. Las células obtenidas con éxito del cartílago porcino de un día mostraron características similares a las de las células madre (CD34-, CD45-, CD90+, CD105+), incluyendo una alta proliferación hasta 20 pasajes (tiempo de duplicación: 1-2 días) y una capacidad para diferenciarse en varios tipos celulares (osteogénesis, adipogénesis y condrogénesis). Las células madre se aplicaron con éxito en la fabricación de las biomembranas. Los componentes proteicos de la biomembrana incluyeron una matriz extracelular y factores de crecimiento. El modelo de trasplante in vitro mostró que la biomembrana inducía la capacidad de reparación de los defectos de cartílago. (4) Conclusiones: Este estudio es el primero en cosechar con éxito células madre del cartílago porcino de un día para la fabricación de biomembranas para una aplicación terapéutica en lesiones del cartílago de la rodilla.