La podofilotoxina (PPT) es un precursor para la síntesis de medicamentos contra el cáncer y otras enfermedades. Las fuentes actuales de PPT son especies en peligro de extinción, con la producción de PPT altamente dependiente de sus condiciones de crecimiento. En relación con la identificación de nuevas fuentes de PPT, el presente estudio tuvo como objetivo recuperar PPT de hojas a través de métodos de extracción atmosférica o a alta presión, con un enfoque en el uso de disolventes ecológicos. La cuantificación de PPT se determinó mediante UHPLC/HRMS/MS. Se llevó a cabo un estudio exhaustivo de la extracción convencional para revelar las condiciones óptimas (disolvente acetato de etilo a temperatura ambiente y una duración de 1 h) para maximizar la recuperación de PPT (alrededor de 30 mg/g de extracto seco y 3 mg/g de material vegetal inicial seco). Se aplicó la ecuación de Peleg para el modelado de la cinética del proceso. El mejor contenido de PPT en el extracto seco final (42-45 mg/g de extracto seco) se obtuvo mediante métodos a alta presión bajo condiciones supercríticas (scCO con etanol o acetato de etilo, 30 MPa, 50 grados C y 100 min) o condiciones de extracción de disolventes acelerados (disolvente acetato de etilo, 10.35 MPa, 20 grados C y 3 ciclos de 15 min). También se determinó la estabilidad estacional y la estabilidad de almacenamiento de la materia prima. Los resultados actuales tienen aplicaciones potenciales en la farmacia para la entrega de PPT a partir de hojas de enebro.