En este estudio, se diseñó y desarrolló la configuración óptima de la extracción con fluidos supercríticos (EFS), lo que llevó a la cuantificación de 11 cannabinoides distintos (cannabidivarin (CBDV), tetrahidrocannabivarin (THCV), cannabidiol (CBD), cannabigerol (CBG), ácido cannabidiólico (CBDA), ácido cannabigerólico (CBGA), cannabinol (CBN), delta 9-tetrahidrocannabinol (-THC), delta 8-tetrahidrocannabinol (-THC), cannabicromeno (CBC) y ácido delta 9-tetrahidrocannabinólico (THCA-A)) extraídos de las flores de cannabis medicinal (sp.). La extracción con dióxido de carbono supercrítico (scCO) se realizó a 37 grados C, a una presión de 250 bar con la máxima densidad teórica de CO (893.7 kg/m), lo que generó el mayor rendimiento de cannabinoides del extracto derivado de la flor. Además, se utilizó un separador en frío (cámara de separación) que se posicionó inmediatamente después de la cámara que contiene la muestra para maximizar el rendimiento. También se encontró que el lavado sucesivo del extracto con scCO fresco aumentó aún más los rendimientos. Se utilizó cromatografía líquida de ultra alto rendimiento acoplada con DAD (uHPLC-DAD) para desarrollar un método para la cuantificación de 11 cannabinoides. Se utilizó la fase estacionaria C18 junto con un programa de gradiente de dos solventes, lo que resultó en la adquisición de un cromatograma bien resuelto en un lapso de 32 minutos. La precisión y exactitud de los cannabinoides aislados a lo largo de períodos inter e intra-día se encontraban dentro de límites aceptables.