() es un patógeno zoonótico con distribución global, que causa enfermedades graves tanto en humanos como en animales y pérdidas económicas en la industria porcina. A medida que aumenta la resistencia a los antibióticos, hay un imperativo urgente de explorar nuevas alternativas antibacterianas. En el presente estudio, seleccionamos el fármaco anticancerígeno 5-fluorouracilo (5-FU) aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) como un fármaco candidato para tratar infecciones. Los resultados mostraron que varios patógenos, especialmente , son más sensibles al 5-FU. Además, la citotoxicidad del 5-FU es relativamente baja. Amplias pruebas in vitro demostraron la pronunciada eficacia bacteriostática y bactericida del 5-FU contra cepas susceptibles y multirresistentes. Sus mecanismos de acción incluyen el daño a las paredes y membranas celulares bacterianas, lo que resulta en la fuga de componentes intracelulares, y la inhibición de la timidilato sintasa (TS), lo que lleva a una disminución de los niveles de trifosfato de desoxitimidina (dTTP), causando finalmente muerte sin timina y daño letal al ADN en las bacterias. Experimentos de eliminación de genes mostraron además que el 5-FU desempeñó un papel al inhibir el gen que codifica la timidina sintasa. Finalmente, determinamos que las infecciones pueden ser aliviadas por el 5-FU en el modelo de infección en ratones. Este estudio enfatiza el potencial antibacteriano del 5-FU contra y proporciona evidencia de su capacidad para dañar las membranas bacterianas y causar daño al ADN. En resumen, el 5-FU puede controlar la infección y se espera que se convierta en una nueva alternativa a los antibióticos.