La acacia negra (L.), un árbol invasivo en Europa, conocido comúnmente por su impacto negativo en la biodiversidad, es una rica fuente de compuestos fenólicos reconocidos en la medicina tradicional. Dado que el perfil de metabolitos depende del entorno y el clima, este estudio tuvo como objetivo proporcionar el primer análisis fitoquímico por LC-MS de la acacia negra de la región de Istria (Croacia). Los compuestos se extrajeron de hojas y flores con etanol al 70% y metanol al 80%. Los fenólicos totales (TP) y flavonoides (TF), así como la capacidad antioxidante (AC) medida por los ensayos ABTS (17.49-146.41 mg TE/g DW), DPPH (24.67-118.49 mg TE/g DW) y FRAP (7.38-77.53 mg TE/g DW), fueron más altos en los extractos de hojas que en los de flores. Se mostraron valores más altos de TP y de compuestos no flavonoides totales (TNF) en los extractos etanólicos que en los metanólicos. En total, se identificaron 64 compuestos, de los cuales los flavonoles (20) y los derivados del ácido hidroxicinámico (15) fueron los más representados. Los flavanoles como la catequina dominaron en los extractos de hojas, seguidos de los flavonoles, siendo los glucuronilos rhamnosilos hexósidos de kaempferol el compuesto principal, respectivamente. Los extractos de flores tuvieron la mayor proporción de flavonas, seguidos de los elagitaninos, siendo los dirhamnosilos hexósidos de luteolina y la vescalagina, respectivamente, los predominantes. Los extractos mostraron buena capacidad de detección de quorum, prevención de formación de biopelículas y capacidad de erradicación. Los resultados proporcionaron nuevas perspectivas sobre las propiedades fitoquímicas como el primer paso hacia su posible uso farmacéutico.