Los programas de conservación de anfibios podrían beneficiarse de la valiosa ayuda de las tecnologías de reproducción asistida. El objetivo del presente estudio fue evaluar la viabilidad de utilizar la inyección de esperma intracytoplasmática (ICSI) para generar crías viables con esperma criopreservado durante varios años utilizando el método de congelación desarrollado inicialmente para aplicaciones de transgénesis en esta especie. Con este fin, se fertilizaron óvulos recién recuperados mediante ICSI utilizando preparaciones de esperma congeladas recientemente o hace 20 años, o mediante fertilización in vitro convencional (IVF) utilizando esperma fresco y móvil. Nuestros resultados demuestran que el esperma puede ser criopreservado durante al menos 20 años sin una reducción significativa en la capacidad de fertilización utilizando ICSI. Se observaron proporciones más altas de malformaciones después de ICSI utilizando semen criopreservado en comparación con IVF con semen fresco, independientemente de la duración de la preservación del esperma. Cuando la metamorfosis se redujo en los renacuajos derivados de ICSI, particularmente cuando se utilizó semen viejo, los animales mostraron un comportamiento normal y se desarrollaron en adultos fértiles.