La seguridad ecológica del paisaje es de gran importancia para mantener el equilibrio ecológico, la protección ecológica, el desarrollo económico y promover el uso sostenible de los recursos territoriales regionales. Este estudio recopila datos de imágenes de teledetección (RS) de tres fases de 2000, 2010 y 2020 para elucidar los cambios espaciales y temporales en el uso del suelo de la Cuenca Kárstica de la Meseta de Guizhou. Construimos un índice de seguridad ecológica del paisaje utilizando el método de ArcGIS y el índice de patrón del paisaje. Con la teoría de la autocorrelación espacial, analizamos la evolución de los patrones del paisaje de la cuenca y los cambios en las características de la seguridad ecológica. Los resultados muestran que la tierra cultivada se está convirtiendo en tierra de construcción en la cuenca de 2000 a 2020. El porcentaje del área de los parches de tierra construida está aumentando. Sin embargo, la cohesión de los parches de tierra cultivada, pastizales y la cuenca está disminuyendo. La seguridad ecológica del paisaje de la Cuenca del Río Nanming está en una tendencia positiva, agrupándose en las áreas urbanas centrales. La tasa de crecimiento del índice de seguridad ecológica del paisaje aumentó un 5.80% de 2000 a 2020, y la agregación del índice de seguridad ecológica estuvo dominada por la agregación alta-alta y baja-baja, que estaba espacialmente correlacionada positivamente con el efecto de agregación espacial. Los hallazgos proporcionan una referencia científica para gestionar el equilibrio ecológico y optimizar la asignación de recursos territoriales en cuencas kársticas.