Escherichia coli patógeno extraintestinal (ExPEC) es un patógeno que puede invadir y colonizar múltiples tejidos fuera del intestino, lo que lleva a enfermedades como sepsis, daño inmunológico y meningitis. En los últimos años, la tasa de aislamiento de ExPEC porcino ha ido en aumento y presenta resistencia a múltiples fármacos, lo que plantea graves desafíos para la prevención y el control de ExPEC porcino. El ensamblaje y la regulación correctos de la expresión de los genes asociados a los flagelos son esenciales para la motilidad y patogenicidad de ExPEC. Este estudio se llevó a cabo para elucidar el papel regulador de EvfG en ExPEC porcino PCN033. Encontramos que la eliminación del gen en el clúster de genes del sistema de secreción tipo VI afectó significativamente la motilidad de ExPEC porcino PCN033. El perfil metabolómico y el análisis de anotación funcional indicaron que la motilidad fue inhibida por la vía de metabolismo energético y la downregulación de los niveles de expresión génica relacionados con el ensamblaje de flagelos. Esta investigación confirmó que puede afectar la motilidad de PCN033 al regular el metabolismo energético y la expresión de genes de flagelos, al tiempo que proporciona una base teórica para estrategias destinadas a prevenir y controlar infecciones causadas por ExPEC porcino PCN033.