Una buena producción de esperma es un requisito notable para los sujetos destinados a la reproducción, particularmente en especies en peligro de extinción, y se ha demostrado que en los sementales de caballo, esto está correlacionado con el volumen testicular. El presente estudio, que involucró a los machos de Martina Franca, tuvo como objetivo determinar si, también en esta raza en peligro, existe una correlación entre el número total de espermatozoides (TSN) y el volumen testicular. Los testículos se midieron tanto con ultrasonido como con un calibrador. El volumen testicular se calculó utilizando dos fórmulas diferentes: una que representa el volumen de un elipsoide y otra desarrollada para describir testículos de forma redonda. La concentración promedio de espermatozoides fue de 380.14 +/- 254.58 x 10/mL, mientras que el TSN promedio fue de 16.34 +/- 7.76 x 10. Nuestros hallazgos evidenciaron una correlación significativa (r > 0.75; < 0.05) solo entre la producción de esperma y el volumen calculado con la fórmula V (cm) = 33.57 x H - 56.57 para testículos de forma redonda. Además, la significancia se evidenció solo para los datos obtenidos con ultrasonido (VTs-us 315.03 +/- 25.83 cm) pero no con calibrador. En conclusión, el volumen testicular puede ser indicativo de buena fertilidad en los machos de Martina Franca; por lo tanto, este parámetro podría considerarse al seleccionar animales de cría.