Antecedentes: Los vesículas extracelulares (EVs) están atrayendo interés como una nueva clase de vehículos de entrega de medicamentos debido a su naturaleza intrínseca de transporte biomolecular en el cuerpo. Anteriormente demostramos que la modificación de la superficie de EV con moléculas específicas del tejido logró la entrega de ADN mediada por EV dirigida. Métodos: Aquí, describimos métodos confiables para (i) generar EVs dirigidos a tumores de EGFR a través de la exhibición de monocuerpos de alta afinidad y (ii) la medición in vitro de la unión de EV utilizando etiquetado de fluorescencia y bioluminiscencia. Los monocuerpos son una clase adecuada de andamios pequeños (10 kDa) no anticuerpos derivados del dominio III de fibronectina tipo III humana (FN3). Resultados: La proteína recombinante consiste en el monocuerpo dirigido a EGFR fusionado al dominio de unión de EV de lactadherina (C1C2), lo que permite que el monocuerpo se muestre en la superficie de los EVs. Además, el uso de moléculas de bioluminiscencia o fluorescencia en la superficie de EV permite la evaluación de la unión de EV a las células objetivo. Conclusiones: En este documento, describimos métodos de ingeniería de EV para generar vehículos de entrega dirigidos utilizando monocuerpos que tendrán diversas aplicaciones para proporcionar un desarrollo terapéutico futuro de EV, incluida la evaluación cualitativa y cuantitativa in vitro de su capacidad de unión.