Para la evaluación de proteínas de los alimentos para rumiantes, la prueba de proteasa proporciona un método exclusivamente enzimático para estimar la degradación de proteínas en el rumen. Dado que las proteínas vegetales a menudo están estructuradas en complejos de carbohidratos, el uso de carbohidrasas durante la prueba podría mejorar su precisión. Se recomienda co-incubar proteasa y carbohidrasas, arriesgando que la actividad de la carbohidrasas se reduzca bajo la influencia de la proteasa. El presente estudio se llevó a cabo para investigar este impacto utilizando alfa-amilasa o el complejo enzimático multi-enzimático Viscozym L como carbohidrasas. La detección de proteasa activa se determinó fotométricamente por fluorescencia utilizando sustratos fluorogénicos internamente apagados (IQFS). La degradación de celulosa, pectina y almidón se determinó espectrofotométricamente utilizando ácido 3,5-dinitrosalicílico como agente colorimétrico. La mezcla de proteasas demostró ser activa para los IQFS seleccionados inmediatamente después del inicio de las mediciones (< 0.05). La hidrólisis de almidón catalizada por alfa-amilasa o Viscozym L, respectivamente, se redujo por co-incubación con la mezcla de proteasas en un máximo del 3% o 37%, respectivamente, a 5 horas de tiempo de incubación (> 0.05). La hidrólisis de pectina y celulosa catalizada por Viscozym L, respectivamente, no se vio significativamente influenciada por la co-incubación con una mezcla de proteasas (> 0.05). Aunque se produjo una disminución en la actividad de carbohidrasas durante la co-incubación con proteasa, fue solo numérica y podría ser contrarrestada por una actividad de carbohidrasas adaptada.