La detección de quórum (QS) controla la producción de varios factores de virulencia bacteriana. Hay evidencia acumulativa que apoya que dirigir el QS puede asegurar una disminución significativa de la virulencia bacteriana. Reducir la virulencia bacteriana ha sido aprobado como una estrategia eficiente para superar el desarrollo de resistencia antimicrobiana. El estudio actual tuvo como objetivo evaluar las actividades anti-QS y anti-virulencia del prazosin, un antagonista del receptor alfa-adrenérgico, contra tres bacterias Gram-negativas virulentas. La evaluación de la actividad anti-QS se llevó a cabo en una serie de experimentos in vitro, mientras que las actividades anti-virulencia del prazosin se probaron en un modelo animal in vivo. La actividad anti-QS del prazosin se evaluó en la producción del pigmento violaceína controlado por QS y la expresión de genes codificadores de QS. Se realizaron pruebas in vitro para evaluar los efectos del prazosin en la formación de biopelículas y la producción de enzimas extracelulares por las bacterias. Se llevó a cabo un ensayo de protección para evaluar la actividad anti-virulencia in vivo del prazosin contra las bacterias. Además, se realizó un acoplamiento molecular in silico preciso para probar la afinidad del prazosin a diferentes receptores de QS. Los resultados revelaron que el prazosin disminuyó significativamente la producción de violaceína y las enzimas virulentas, proteasa y hemolisinas, en las cepas probadas. El prazosin disminuyó significativamente la formación de biopelículas in vitro y la virulencia bacteriana in vivo. La actividad anti-QS del prazosin fue probada por su regulación a la baja de los genes codificadores de QS y su evidente afinidad de unión a los receptores de QS. En conclusión, el prazosin podría considerarse un agente anti-virulencia eficiente para ser utilizado como un adyuvante a los antibióticos, sin embargo, requiere más evaluaciones farmacológicas antes de su aplicación clínica.