El sector agrícola debe producir alimentos al mismo ritmo que el crecimiento de la población, teniendo en cuenta la contaminación y los costos. Por esta razón, se han empleado prácticas agrícolas conservadoras en todo el mundo. La espectroscopia de reflectancia total atenuada-transformada de Fourier (ATR-FTIR) tiene la capacidad de proporcionar una instantánea de la composición macromolecular de una muestra de manera oportuna y rentable, y se ha aplicado ampliamente en el campo de la agricultura para evaluar la calidad de los alimentos. El objetivo de este estudio fue explotar la espectroscopia ATR-FTIR para evaluar el impacto de diferentes métodos de labranza del suelo (labranza convencional, LC; labranza mínima, LM, y siembra directa, SD) y niveles de fertilización nitrogenada (0, 90 y 180 kg N/ha) en la composición macromolecular de hojas y carios de trigo duro (subsp.). El análisis de los datos espectrales reveló que la calidad del trigo duro, en términos de contenido de proteínas, cultivado en suelo sin labranza no se redujo. De hecho, en cuanto a los carios, los diferentes métodos de labranza solo influenciaron el contenido de lípidos y hemicelulosa, mientras que la composición macromolecular de las hojas fue sensible a los métodos de labranza principalmente durante la etapa temprana de crecimiento. Además, no se encontraron efectos relevantes en hojas y carios cuando se utilizaron diferentes concentraciones de fertilizante. Estos resultados proporcionan conocimientos importantes que respaldan la adopción de tratamientos de suelo sin labranza y dosis reducidas de fertilización para el desarrollo de estrategias de manejo de trigo duro y respaldan el uso de la espectroscopia para prácticas agrícolas conservadoras.