Las células estromales mesenquimales multipotentes (MSCs) se utilizan en la ingeniería de tejidos y la medicina regenerativa. La aislamiento y expansión in vitro de las MSCs implican el uso de suero bovino fetal (FBS). Sin embargo, se han planteado muchas preocupaciones sobre la seguridad de este producto. En este estudio, se probaron aditivos alternativos derivados ya sea de sangre periférica o de cordón como reemplazo de FBS. Los lisados de plaquetas (PL) de sangre periférica y de cordón se utilizaron para la expansión de las MSCs. Los niveles de factores de crecimiento en los PL de sangre periférica (PB) y de cordón (CB) se determinaron utilizando el Monitoreo de Reacciones Múltiples (MRM). Finalmente, se determinaron el tiempo de duplicación celular (CDT), la diferenciación trilineal y la caracterización fenotípica de las MSCs expandidas con FBS y PL. Las MSCs tratadas con medio de cultivo que contenía FBS y PB-PL, se aislaron y expandieron con éxito, mientras que las MSCs tratadas con CB-PL no pudieron mantenerse en cultivo. Además, el análisis de MRM arrojó diferencias en los niveles de factores de crecimiento entre PB-PL y CB-PL. Además, las MSCs se expandieron con éxito con FBS y PB-PL y mostraron diferenciación trilineal y características fenotípicas estables. PB-PL podría utilizarse como un aditivo alternativo para la producción de medio de cultivo de MSCs aplicado a la expansión y mantenimiento de MSCs en estudios clínicos a gran escala libres de xenogenia.