El aceite de oliva es apreciado en todo el mundo por sus propiedades nutricionales y organolépticas únicas. Es rico en ácidos grasos insaturados y antioxidantes, que son bien conocidos por sus beneficios para la salud. Las características cualitativas del aceite de oliva pueden verse afectadas negativamente por diversos factores bióticos y abióticos. En particular, los patógenos microbianos, como los hongos mohosos, pueden causar la deterioración del aceite y, por lo tanto, representar un riesgo serio para la salud del consumidor. En este estudio, se utilizaron métodos basados en ADN, es decir, PCR en tiempo final, PCR en tiempo real (RT-PCR) y amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), todos basados en la región ITS2-28S, para evaluar la contaminación fúngica de muestras de aceite de oliva virgen extra. Todas las técnicas de ADN pudieron detectar, aunque a diferentes niveles, infecciones fúngicas que afectan algunos de los parámetros básicos de calidad de los aceites de oliva analizados. Sin embargo, en comparación con la PCR en tiempo final y/o RT-PCR, el ensayo LAMP simplificó y aceleró en gran medida la identificación de mohos patógenos en las muestras de aceite. Esto puede alentar a la industria del aceite de oliva a adoptar este método para ofrecer al consumidor un aceite con parámetros de salud específicos y, por lo tanto, garantizar la seguridad y calidad de este preciado producto alimenticio.