Para la preservación a largo plazo de los recursos genéticos, se han desarrollado técnicas de criopreservación para el germoplasma de fresa, utilizando principalmente puntas de brote cultivadas in vitro. En este estudio, se probó la estabilidad genética en condiciones de invernadero para seis accesiones de fresa (IT232511, PHS0132, IT245810, IT245830, IT245852 y IT245860) derivadas de los siguientes procedimientos: (1) propagación convencional (GH: mantenido en invernadero); (2) propagación in vitro (TC: cultivo de tejidos); (3) pretratamiento antes de la criopreservación (-LN: exposición a nitrógeno líquido no); y (4) criopreservación (+LN: exposición a nitrógeno líquido). Para probar el rendimiento de los rasgos fenotípicos, medimos seis rasgos vegetativos y cinco rasgos de fruta. No hubo diferencias distintas en la mayoría de las características, pero algunos rasgos, como el contenido de azúcar y el pH de las frutas en tres accesiones, mostraron valores más altos en +LN en comparación con GH. Sin embargo, las diferencias desaparecieron en la primera generación de corredores. Para probar las variaciones genéticas, se generaron un total de 102 bandas mediante doce iniciadores de repetición de secuencia simple inter (ISSR). Se encontraron algunas bandas polimórficas solo en plantas derivadas de TC de IT245860, que no fue criopreservada. El análisis de secuenciación de cuatro bandas polimórficas producidas por ISSR_15 mostró que ninguna de estas secuencias coincidía con los genes caracterizados en NCBI. No se observó anormalidad fenotípica en todas las plantas. Este estudio indica que las plantas criopreservadas de las seis accesiones de fresa son fenotípicamente y genéticamente estables. Por lo tanto, los resultados de este estudio pueden ayudar a implementar el criobanco del germoplasma de fresa.