Evaluación de Cribado y Funcional de Cuatro Promotores
Autores: Zhang, Chen-Yi; Ye, Zha-Long; Qi, Li-Wang; Yang, Ling; Li, Wan-Feng
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
Evaluación de Cribado y Funcional de Cuatro Promotores
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Promotores
Transformación genética
Genes
Expresión
Vectores
Actividad
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 8
Citaciones: Sin citaciones
Los promotores son herramientas poderosas para la creación de nuevas variedades utilizando tecnología transgénica. Sin embargo, la baja y inestable expresión de los genes objetivo sigue siendo un factor limitante en la transformación genética de Larix leptolepis (lárbol japonés). En este estudio, analizamos datos de transcriptoma, seleccionamos genes altamente expresados, clonamos sus promotores y construimos vectores de expresión vegetal que contenían el gen reportero impulsado por estos promotores. Los vectores recombinantes se introdujeron en el callo embriogénico mediante el método de transformación genética transitoria o estable mediada por Agrobacterium, y luego se determinó la actividad del promotor midiendo la expresión y su actividad enzimática en los materiales transformados. Se identificaron cuatro genes altamente expresados: , , y . Los fragmentos de 2000 pb aguas arriba del ATG en estas secuencias se clonaron como promotores y se nombraron , , , y . Los análisis de RT-PCR semicuantitativos y cuantitativos de los materiales de transformación genética transitoria mostraron que los cuatro promotores podían impulsar la expresión, lo que indica que tienen actividades de promotor. Los análisis de RT-PCR semicuantitativos y cuantitativos y la tinción histoquímica de los materiales de transformación genética estable mostraron que el promotor tenía una actividad más alta que los otros tres promotores y el promotor. Por lo tanto, se sugirió que el promotor se utilizara en la transformación genética de la larch.
Descripción
Los promotores son herramientas poderosas para la creación de nuevas variedades utilizando tecnología transgénica. Sin embargo, la baja y inestable expresión de los genes objetivo sigue siendo un factor limitante en la transformación genética de Larix leptolepis (lárbol japonés). En este estudio, analizamos datos de transcriptoma, seleccionamos genes altamente expresados, clonamos sus promotores y construimos vectores de expresión vegetal que contenían el gen reportero impulsado por estos promotores. Los vectores recombinantes se introdujeron en el callo embriogénico mediante el método de transformación genética transitoria o estable mediada por Agrobacterium, y luego se determinó la actividad del promotor midiendo la expresión y su actividad enzimática en los materiales transformados. Se identificaron cuatro genes altamente expresados: , , y . Los fragmentos de 2000 pb aguas arriba del ATG en estas secuencias se clonaron como promotores y se nombraron , , , y . Los análisis de RT-PCR semicuantitativos y cuantitativos de los materiales de transformación genética transitoria mostraron que los cuatro promotores podían impulsar la expresión, lo que indica que tienen actividades de promotor. Los análisis de RT-PCR semicuantitativos y cuantitativos y la tinción histoquímica de los materiales de transformación genética estable mostraron que el promotor tenía una actividad más alta que los otros tres promotores y el promotor. Por lo tanto, se sugirió que el promotor se utilizara en la transformación genética de la larch.