Los metabolitos de los líquenes representan una amplia gama de sustancias con una variedad de efectos biológicos. El presente estudio fue diseñado para analizar los posibles efectos antiproliferativos, antimicrobianos y antioxidantes de varios extractos de líquenes y sus metabolitos secundarios (atranorina, ácido fisódico, ácido evernico y ácido girofórico). El extracto crudo, así como los metabolitos aislados, mostraron una potente actividad antiproliferativa y citotóxica en una amplia gama de líneas celulares cancerosas en modelos 2D (monocapa) y 3D (esferoides). Además, se evaluaron las actividades antioxidantes (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH)) y antimicrobianas in vitro. Los datos mostraron que los extractos de líquenes, así como los compuestos presentes, poseían potencial biológico en los ensayos estudiados. También se observó que los extractos eran más eficientes y sus compuestos principales mostraron fuertes efectos como agentes antiproliferativos, antioxidantes y antibacterianos. Además, demostramos la importancia de los modelos 2D y 3D para el descubrimiento de fármacos para futuros estudios in vivo. A pesar de que los compuestos de líquenes han sido descuidados por la comunidad científica durante largos períodos, hoy en día son objeto de investigación debido a sus efectos prometedores.