Un método simple de etiquetado de colesterol fluorescente para crioproteger y detectar lipoproteína-X plasmática
Autores: Neufeld, Edward B.; Freeman, Lita A.; Durbhakula, Vinay; Sampson, Maureen L.; Shamburek, Robert D.; Karathanasis, Sotirios K.; Remaley, Alan T.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Un método simple de etiquetado de colesterol fluorescente para crioproteger y detectar lipoproteína-X plasmática
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Lipoproteína-x
Nefrotóxico
Colesterol libre
Fosfolípidos
Deficiencia familiar de LCAT
Colestasis biliar
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 18
Citaciones: Sin citaciones
Las lipoproteínas-X (LpX) son partículas lipoproteicas anormales nefrotóxicas enriquecidas en colesterol libre y fosfolípidos. Las LpX con composiciones lipídicas distintivas se forman en pacientes afectados por deficiencia familiar de LCAT (FLD) o colestasis biliar. La LpX es difícil de detectar mediante tinciones lipídicas estándar debido a la ausencia de un núcleo lipídico neutro y porque es inestable al almacenamiento, particularmente cuando está congelada. Recientemente hemos informado que la tinción específica de colesterol libre con filipina después de la electroforesis en gel de agarosa detecta de manera sensible la LpX en plasma humano fresco. En este documento, describimos un método cualitativo aún más simplificado para detectar LpX en plasma humano FLD o colestático, tanto fresco como descongelado. Se utilizó colesterol fluorescente complejo con BSA libre de ácidos grasos para etiquetar la LpX y se añadió junto con trehalosa para criopreservar la LpX en plasma. El colesterol fluorescente unido a la LpX se observó con alta sensibilidad después de la separación de otras lipoproteínas mediante electroforesis en gel de agarosa. Esta metodología puede desarrollarse fácilmente en un ensayo simple para el diagnóstico clínico de FLD y enfermedades hepáticas biliares y para monitorear la eficacia de tratamientos destinados a reducir la LpX en plasma en estos estados de enfermedad.
Descripción
Las lipoproteínas-X (LpX) son partículas lipoproteicas anormales nefrotóxicas enriquecidas en colesterol libre y fosfolípidos. Las LpX con composiciones lipídicas distintivas se forman en pacientes afectados por deficiencia familiar de LCAT (FLD) o colestasis biliar. La LpX es difícil de detectar mediante tinciones lipídicas estándar debido a la ausencia de un núcleo lipídico neutro y porque es inestable al almacenamiento, particularmente cuando está congelada. Recientemente hemos informado que la tinción específica de colesterol libre con filipina después de la electroforesis en gel de agarosa detecta de manera sensible la LpX en plasma humano fresco. En este documento, describimos un método cualitativo aún más simplificado para detectar LpX en plasma humano FLD o colestático, tanto fresco como descongelado. Se utilizó colesterol fluorescente complejo con BSA libre de ácidos grasos para etiquetar la LpX y se añadió junto con trehalosa para criopreservar la LpX en plasma. El colesterol fluorescente unido a la LpX se observó con alta sensibilidad después de la separación de otras lipoproteínas mediante electroforesis en gel de agarosa. Esta metodología puede desarrollarse fácilmente en un ensayo simple para el diagnóstico clínico de FLD y enfermedades hepáticas biliares y para monitorear la eficacia de tratamientos destinados a reducir la LpX en plasma en estos estados de enfermedad.