El biofilm, una comunidad de bacterias, es tolerante a agentes antimicrobianos y está presente en heridas crónicas. En un ensayo clínico de úlceras del pie diabético (DFU), el uso de una membrana amniótica viable criopreservada humana (CVAM) resultó en una alta tasa de cierre de heridas y reducción de infecciones relacionadas con las heridas. Nuestro estudio anterior demostró que la CVAM posee actividad antimicrobiana intrínseca contra un espectro de bacterias asociadas a heridas bajo condiciones de cultivo planctónico. En este estudio, evaluamos el efecto de la CVAM y el tejido umbilical viable criopreservado (CVUT) en la formación de biofilm de los dos patógenos más prominentes asociados con heridas crónicas. En primer lugar, mostramos que, al igual que la CVAM, la CVUT liberó actividad antibacteriana contra múltiples patógenos bacterianos y la devitalización de la CVUT redujo su actividad antibacteriana. La formación de biofilm se midió utilizando un método de alto rendimiento y un modelo de tejido dérmico porcino ex vivo. Demostramos que la formación de biofilm se redujo significativamente en presencia de medios condicionados derivados de CVAM o CVUT en comparación con el medio de ensayo de control. La formación de biofilm en tejidos dérmicos porcinos saturados con medio condicionado de CVAM se redujo en un 97% en comparación con la formación de biofilm en los tejidos dérmicos saturados con el medio de control. La formación de biofilm en tejidos dérmicos saturados con medio condicionado de CVUT se redujo en un 72% en comparación con la formación de biofilm en los tejidos de control. Este estudio es el primero en mostrar que los tejidos placentarios viables humanos criopreservados liberan factores que inhiben la formación de biofilm. Nuestros resultados proporcionan una explicación para la observación in vivo de su capacidad para apoyar la cicatrización de heridas.