El objetivo del presente estudio in vitro fue evaluar la penetración intratubular de tres selladores biocerámicos en el retratamiento de conductos radiculares. Aquí, 30 dientes humanos de raíz simple fueron instrumentados con el sistema Protaper Universal y llenados con gutapercha y el sellador a base de resina epóxica AH Plus mezclado con rodamina B. Después de dos semanas en un ambiente húmedo, fueron re-instrumentados con Reciproc Blue y divididos en tres grupos según el sellador endodóntico a utilizar en el relleno (n = 10): G1: CeraSeal, G2: TotalFill BC Sealer, G3: TotalFill BC Sealer HiFlow. Para el relleno, se utilizó una técnica de cono único, y los respectivos selladores fueron mezclados con fluoresceína. Las raíces fueron luego seccionadas a 2, 5 y 8 mm (puntos de medición apical, medial y coronal, respectivamente) desde el ápice, y se evaluó la profundidad de penetración de los túbulos dentinarios y el porcentaje de penetración alrededor del perímetro del canal mediante microscopía de escaneo láser confocal (CLSM). La penetración entre grupos se comparó utilizando la prueba de Kruskal-Wallis, y dentro de cada grupo utilizando la prueba de Wilcoxon. La significancia estadística se estableció en < 0.05. Se encontró una reducción no significativa en las profundidades de penetración y en un porcentaje de penetración alrededor del perímetro del canal entre AH Plus y los selladores a base de silicato de calcio probados ( > 0.05). En consecuencia, esta reducción puede no afectar de manera negativa el sellado tridimensional del sistema de conductos radiculares. La profundidad de penetración y el porcentaje de penetración alrededor del perímetro del canal tanto en el tratamiento de conductos radiculares como en el retratamiento se redujeron significativamente de los puntos coronales a los apicales en todos los grupos ( < 0.05).