(1) Antecedentes: Tradicionalmente, el lúpulo se propaga utilizando fragmentos de rizomas o esquejes de tallos herbáceos. La micropropagación, por lo tanto, ofrece una alternativa viable para la producción a gran escala de plantas sanas y genéticamente uniformes, independientemente de la temporada y en espacios confinados. Un sistema de inmersión temporal (TIS) facilita la propagación de plantas al alternar inmersiones de microesquejes en medio de cultivo líquido con períodos secos, evitando la acumulación de gases mediante ventilación forzada. (2) Métodos: En este estudio, se evaluó la respuesta de plántulas de lúpulo, cv. Columbus, cultivadas en medios con y sin sacarosa, en sistemas de cultivo sólidos y líquidos (biorreactor Plantform), considerando su efecto en parámetros morfo-fisiológicos, en el contenido total de fenoles y en la capacidad antioxidante. Además, para hacer el TIS más eficiente, se evaluó el efecto de la duración de la inmersión (tres y seis minutos cada doce horas). (3) Resultados: La presencia de sacarosa en el medio de cultivo mejoró la proliferación de plantas en ambos sistemas de cultivo probados: sólido y líquido (particularmente para los explantes sumergidos durante tres minutos). En el TIS, se obtuvieron plántulas con una mayor capacidad antioxidante cuando se utilizó medio de cultivo libre de sacarosa. (4) Conclusiones: Este estudio confirma la eficacia del TIS como método de propagación de lúpulo, pero también como una herramienta válida para producir biomasa que se utilizará como fuente de compuestos bioactivos.