Recientemente, el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) ha surgido como un objetivo terapéutico de interés para el cáncer de pulmón de células no pequeñas en humanos. El papel de HER2 en los adenocarcinomas pulmonares caninos está poco documentado. Para abordar esta brecha, este estudio empleó tres metodologías: inmunohistoquímica (IHC), hibridación in situ por fluorescencia (FISH) y secuenciación de nueva generación (NGS) para investigar la expresión de proteínas, la amplificación genética y la mutación de HER2 en 19 adenocarcinomas pulmonares primarios caninos. Por IHC, 3 de 19 casos presentaron sobreexpresión 3+, 6 fueron 2+ y 10 fueron negativos. Con FISH, 2 casos fueron amplificados (12.5%), 3 fueron inadecuados para los análisis y los demás no fueron amplificados. Con NGS, siete casos fueron inadecuados. Todos los demás casos fueron tipo salvaje, excepto por un caso IHC 3+, que fue amplificado con FISH y con una mutación específica ya descrita en adenocarcinoma pulmonar humano, V659E. Esta mutación es probablemente sensible a los fármacos inhibidores de la tirosina quinasa. Estos resultados son similares a los de la medicina humana y a los pocos datos en la literatura sobre carcinomas pulmonares caninos; la presencia del 12.5% de casos amplificados en perros sienta las bases para futuros fármacos dirigidos contra las alteraciones de HER2.