Este estudio exploró los efectos de los niveles de proteína y energía en la fermentación del rumen bajo diferentes temperaturas de incubación utilizando un sistema in vitro. Encontramos que temperaturas de incubación más altas aumentaron el NH-N y los ácidos grasos volátiles totales (TVFA), pero disminuyeron las bacterias asociadas al líquido (LAB). Por el contrario, niveles de proteína más altos elevaron los niveles de NH-N y acetato, pero redujeron el propionato, mientras que niveles de energía más altos tuvieron el efecto opuesto en las propiedades de fermentación del rumen. Además, las temperaturas de incubación y los niveles de energía afectaron las características de fermentación del rumen y las cantidades de proteína LAB. Sin embargo, no hubo interacciones significativas entre los niveles de energía o proteína y las temperaturas de incubación para TVFA y LAB. Los hallazgos sugirieron que el ajuste de los niveles de un solo nutriente de proteína o energía no sería suficiente para mejorar la síntesis de proteína microbiana bajo diferentes temperaturas de incubación.