El desarrollo de medios libres de suero fibrocondrogénicos es importante para regenerar el fibrocartílago enfermo y lesionado, pero no existen protocolos definidos. Hacia este objetivo, caracterizamos el efecto de cuatro medios candidatos fibrocondrogénicos libres de suero que contienen factor de crecimiento transformante beta-3 (TGF-beta3), factor de crecimiento similar a la insulina-1 (IGF-1) y factor de crecimiento de fibroblastos-2 (FGF-2) con alto/bajo contenido de glucosa y con/sin dexametasona en células madre mesenquimales humanas (hMSCs) a través de ensayos de proliferación y diferenciación. En los ensayos de proliferación Ki67, los medios libres de suero que contenían baja glucosa y dexametasona mostraron el mayor crecimiento. En los ensayos de expresión génica, los medios libres de suero que contenían baja glucosa y medios condrogénicos disponibles comercialmente (COM) indujeron una alta expresión de factores de transcripción fibrocondrogénicos (escleraxis y Factor de Transcripción de la Caja SRY 9) y niveles de proteínas de matriz extracelular (aggrecan, colágeno tipo I y colágeno tipo II), respectivamente. En la tinción de inmunofluorescencia, los medios libres de suero que contenían alta glucosa y COM indujeron una alta expresión de factores de transcripción fibrocondrogénicos (SCX y SOX9) y proteínas de matriz extracelular (COL1A1, COL2A1 y colágeno tipo X/COL10A1), respectivamente. En la tinción citoquímica, COM y los medios libres de suero que contenían dexametasona mostraron un alto contenido de colágeno, mientras que los medios libres de suero que contenían alta glucosa y dexametasona exhibieron altos niveles de glicosaminoglicanos (GAG). En resumen, los medios definidos libres de suero que contenían alta glucosa mostraron el mayor potencial fibrocondrogénico. En resumen, este trabajo estudió condiciones propicias para la fibrocondrogénesis, que pueden optimizarse aún más para posibles aplicaciones en la ingeniería de tejidos de fibrocartílago.