La cirugía guiada por fluorescencia puede ayudar en la visualización intraoperatoria de tejidos objetivo, con aplicaciones prometedoras en oncología quirúrgica humana y veterinaria. El objetivo de este estudio fue evaluar el rendimiento de dos sistemas de cámaras de fluorescencia, IC-Flow y Visionsense VS3 Iridum, para la detección de dos fluoróforos no dirigidos (ICG y IRDye-800) y dos fluoróforos dirigidos (Angiostamp y FAP-Cyan) bajo diferentes condiciones de luz ambiental, incluyendo luz ambiental, LED de nueva generación y fuentes de luz artificial halógena, que son comúnmente utilizadas en quirófanos. Se realizaron imágenes de seis diluciones de los fluoróforos en kits fantasma utilizando los dos sistemas de cámaras. Se determinaron el límite de detección (LOD) y la relación señal-fondo media (mSBR). Los valores más altos de mSBR y un LOD más bajo se obtuvieron en condiciones de oscuridad para ambos sistemas. Bajo luces de sala, las capacidades disminuyeron, pero el mSBR se mantuvo por encima de 3 (= señal claramente detectable). El LOD y el mSBR empeoraron bajo luces quirúrgicas para ambos sistemas de cámaras, con un mayor impacto de las bombillas halógenas en Visionsense VS3 Iridium y de las luces LED en IC-Flow debido a la contribución de estas luces en el espectro de infrarrojo cercano. Al considerar la implementación de la FGS en la rutina clínica, los cirujanos deben evaluar con cautela la contribución espectral de las luces en el quirófano.