Se investigó el efecto de la sustitución parcial de la harina de soja por cantidades iguales de semillas de lino y lupinos en las dietas de vacas lecheras y novillas Holstein. Un total de 6 animales (30 multíparas y 30 primíparas) fueron asignados a dos grupos iguales en un diseño de bloques aleatorizados y alimentados con dietas TMR de control (grupo CO) o modificadas (grupo FL) desde tres semanas antes del parto hasta el día 40 posparto. El TMR del grupo CO contenía maíz, cebada, harina de soja, torta de colza, silo de maíz y heno de alfalfa, mientras que en el grupo FL se utilizaron cantidades iguales de semillas de lino enteras y lupinos para reemplazar el 50% de la harina de soja en el TMR. Todos los animales fueron alimentados dos veces al día con una ración diaria de 24 kg de materia seca por animal. La ordeña se realizó tres veces al día y se registró la producción de leche durante cada ordeña. Las muestras de leche fueron analizadas por composición química y contenido de SCC. Se fabricaron quesos blancos a partir de leche a granel de cada grupo a nivel industrial. La leche a granel y el queso blanco fueron analizados por composición química y perfil de ácidos grasos; el queso también fue evaluado por sus propiedades organolépticas. Los resultados indican que la producción de leche no difirió entre los grupos. Los valores de oxidación lipídica fueron similares entre los grupos, tanto para la leche como para el queso. Sin embargo, la inclusión de FL resultó en menores (< 0.05) carbonilos de proteínas y mayores (< 0.05) compuestos fenólicos en muestras de leche y queso. La leche del grupo FL presentó disminución de ácido palmítico (< 0.05) y ácido mirístico (< 0.05) y aumento de ácido oleico (< 0.05) y ácido linoleico (< 0.05) en comparación con el grupo CO. El queso blanco del grupo FL mostró una disminución de ácidos grasos saturados (SFA) (< 0.05), un aumento de ácidos grasos monoinsaturados (MUFA) (< 0.05) y un mayor aumento de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) (< 0.05) en comparación con el del grupo CO. El queso blanco de las vacas alimentadas con dietas que incluían semillas de lino y lupinos mostró propiedades composicionales y organolépticas bastante similares al queso del grupo de control; el aroma, la textura y el color fueron aceptables y deseables en ambos quesos. Sin embargo, se encontraron niveles aumentados de ácidos grasos poliinsaturados n-3 en el queso de los animales alimentados con FL. La sustitución de la harina de soja por semillas de lino y lupinos en las dietas de vacas Holstein merece una investigación adicional, especialmente hacia la producción de quesos que satisfagan la demanda de los consumidores por productos lácteos novedosos y más saludables.