La leptospirosis es una zoonosis generalizada reconocida como una enfermedad infecciosa reemergente en una amplia variedad de especies animales, incluidos humanos y perros. No existen datos sobre la presencia de especies en la población canina de la isla de Cerdeña. Este estudio informa sobre la primera seroencuesta para leptospirosis en perros de refugios y de propietarios de seis áreas del norte de Cerdeña. Se analizaron sueros de 1296 perros mediante la prueba de aglutinación microscópica (MAT) específica para nueve serovariedades diferentes que se sabe que están bien extendidas en el entorno mediterráneo. Además, se analizaron homogenatos renales de roedores recolectados en el área de estudio mediante PCR en tiempo real LipL32 y tipo de secuencia de múltiples loci (MLST) sobre la base del análisis de siete loci concatenados. Un total del 13% de los sueros examinados (IC 95%: 11-15) dio positivo para una o más serovariedades detectadas por MAT; los anticuerpos para el serogrupo Icterohaemorrhagiae (57%; IC 95%: 49-65) fueron los más comunes, seguidos por las serovariedades Bratislava (22%; IC 95%: 16-28), Canicola (14%; IC 95%: 9-19) y Grippotyphosa (7%; IC 95%: 3-11). Los análisis de MLST en aislados de roedores identificaron y genomospecies. Diferentes serovariedades pertenecientes a serogrupos patógenos están circulando en perros de la isla. Además, los datos obtenidos de los roedores indicaron que probablemente actúan como reservorios de espiroquetas. Se necesitan más estudios seroepidemiológicos para obtener datos de otros sitios de recolección en Cerdeña y aumentar la información sobre las especies que circulan en esta área.