Las fresas se propagan principalmente por estolones, que se pueden dividir en tipos monopodiales y simpodiales. Los estolones monopodiales producen consistentemente ramets en cada nodo después del primer brote dormante único, mientras que los estolones simpodiales desarrollan un brote dormante antes de cada ramet. El estolón simpodial abarca tanto brotes dormantes como brotes de ramet, lo que lo hace adecuado para estudiar el mecanismo de formación de diferentes tipos de estolones. En este estudio, utilizamos estolones simpodiales como materiales y exploramos los mecanismos subyacentes al desarrollo del estolón simpodial a través de análisis transcriptómicos y fitohormonales. Los resultados del transcriptoma revelaron que la auxina, la citoquinina y los azúcares probablemente actúan como reguladores principales. El análisis de hormonas endógenas reveló que la inactivación de la auxina podría influir en la dormancia de los brotes. La aplicación exógena de citoquinina indujo principalmente a los brotes dormantes a desarrollarse en estolones secundarios, siendo la proporción de formación de ramets muy baja, menos del 10%. Además, el análisis de redes de coexpresión génica ponderada identificó genes clave involucrados en la formación de ramets, incluidos los genes de transporte y respuesta a auxina, el gen de activación de citoquinina y los genes de transporte de glucosa. De manera consistente, los experimentos de cultivo in vitro confirmaron que la glucosa mejora la transición de brotes dormantes a ramets en un plazo de dos días. En conjunto, la citoquinina y la glucosa actúan como rompedoras de la dormancia, siendo la citoquinina la que impulsa principalmente la formación de estolones secundarios y la glucosa la que promueve la generación de ramets. Este estudio mejoró nuestra comprensión del patrón de estolones y el desarrollo de brotes en el estolón simpodial de las fresas.