La expresión aberrante de las proteínas y factores de choque térmico se reveló estrechamente asociada con la reproducción masculina. El factor de choque térmico 2 (HSF2) es un factor de transcripción que participa en la regulación de diversas vías de desarrollo. Sin embargo, el papel y el correspondiente mecanismo molecular en la esterilidad de los machos de yak de ganado aún se comprenden poco. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue obtener la secuencia y la información biológica del gen del yak de ganado e investigar los perfiles de expresión espaciotemporales del locus durante el desarrollo de los testículos del yak de ganado. Además, se analizó la expresión diferencial entre el yak de ganado y el yak, y se comparó la metilación de las regiones promotoras correspondientes. Nuestros resultados mostraron que un fragmento adicional de 54 pb y una mutación sin sentido (lisina a ácido glutámico) estaban presentes en el gen del yak de ganado, lo que correlacionó con una expresión enriquecida en el tejido testicular. Además, la expresión del gen mostró cambios dinámicos durante el crecimiento de los testículos, alcanzando un pico en la adultez. La IHC indicó que la proteína HSF2 se localizaba principalmente en espermatocitos (PS), espermatogonias (SP) y células de Sertoli (SC) en los testículos del yak de ganado, en comparación con las células correspondientes del ganado y el yak. Además, la PCR de secuenciación de bisulfito (BSP) reveló que los sitios CpG metilados en la región promotora del HSF2 del yak de ganado eran más numerosos que en el homólogo del yak, lo que sugiere hipermetilación de esta región en el yak de ganado. En conjunto, la baja abundancia de expresión y la hipermetilación pueden subyacer a la obstrucción de la espermatogénesis, lo que conduce a la infertilidad masculina del yak de ganado. Nuestro estudio proporcionó una guía básica para el gen en la reproducción masculina y una nueva perspectiva sobre los mecanismos de esterilidad masculina del yak de ganado.