Los exosomas de células cancerosas están implicados en la progresión y metástasis del cáncer, transportando factores inmunosupresores que limitan las capacidades antitumorales de las células inmunitarias. Se ha explorado el desarrollo de un sistema de perfusión de flujo en tiempo real con un constructo de células/escalera 3D como una herramienta novedosa en el estudio de células T y exosomas de células cancerosas. Los exosomas de cáncer de pulmón humano (H1299 y A549) se co-cultivaron en un biorreactor de flujo unidireccional con células T CD8+ inmovilizadas en andamios de ácido poli(L-láctico) (PLLA) funcionalizados con RGD impresos en 3D y se evaluó la producción de IL-2. La producción de IL-2 se investigó para una amplia gama de relaciones entre células T y exosomas. Con la exitosa incorporación del motivo de unión RGD en la superficie de PLLA a densidades controlables, las células T CD8+ se unieron exitosamente a discos 2D y andamios porosos de PLLA impresos en 3D. La unión de células T aumentó con la densidad de superficie RGD. El diámetro de las células T unidas fue de 7.2 +/- 0.2 um para densidades de RGD por debajo de 0.5 nmoles/mm, pero cayó a 5.1 +/- 0.3 um cuando la densidad de RGD fue de 2 nmoles/mm debido a la sobrepoblación. Cuanto mayor era el número de exosomas cancerosos, menor era la producción de IL-2 por las células T unidas a la superficie. En discos 2D, la producción de IL-2 se silenció para relaciones entre células T y exosomas superiores a 1:10 en condiciones estáticas. El silenciamiento de la producción de IL-2 en andamios porosos 3D estáticos requirió relaciones superiores a 1:20. La incorporación de flujo resultó en un desprendimiento moderado a significativo de células T. Las porciones de células T retenidas en los andamios 3D después de una exposición de 4 h a 0.15 o 1.5 mL/min de flujo de perfusión fueron del 89 +/- 11% y 30 +/- 8%, respectivamente. En andamios 3D y en presencia de flujo a 0.15 ml/min, tanto los exosomas cancerosos H1299 como A549 suprimieron significativamente la producción de IL-2 para relaciones entre células T y exosomas de 1:1000. El nivel mucho más alto de exosomas necesario para silenciar la producción de IL-2 de células T cultivadas bajo flujo unidireccional, en comparación con condiciones estáticas, denota la importancia de las condiciones de cultivo y el entorno hidrodinámico en las interacciones entre células T CD8+ y exosomas cancerosos.