El refinamiento es uno de los principios que busca promover el bienestar en los animales de investigación. Las técnicas utilizadas durante un protocolo experimental, incluida la selección de la eutanasia, deben prevenir y minimizar el sufrimiento. Aunque los métodos de eutanasia actuales aplicados a roedores de laboratorio son aceptados, los hallazgos controvertidos sobre el estrés/angustia potencial que pueden causar son un campo de investigación. El objetivo fue evaluar la respuesta térmica de ratas Wistar durante varios métodos de eutanasia utilizando termografía infrarroja (IRT) para determinar el método que previene o disminuye la respuesta de estrés y el sufrimiento prolongado. Se evaluaron pentobarbital (G), CO (G), decapitación (G), isoflurano (G), ketamina + xilazina (G) y ketamina + CO (G) en cinco momentos de evaluación con IRT para identificar cambios en la temperatura superficial de cuatro regiones anatómicas: ocular (T grados), auricular (T grados), interescapular (T grados) y caudal (T grados). Se encontraron diferencias significativas (< 0.05) en G y G, registrando aumentos de temperatura desde la administración del fármaco hasta la cesación de la frecuencia respiratoria y la frecuencia cardíaca. En particular, el isoflurano mostró una respuesta térmica marcada en T grados, T grados, T grados y T grados, sugiriendo que, en general, los métodos de eutanasia por inhalación inducen estrés en las ratas y que el isoflurano podría potencialmente causar angustia, un efecto que debe ser considerado al decidir sobre métodos de eutanasia humanitaria en roedores de laboratorio.