Este estudio investigó los efectos de un simbiótico que consiste en inulina, administrado por vía oral a pollitos de engorde el día de la incubación (DOH) en la incubadora y en el alimento durante un período de 21 días. Un total de 480 pollos machos Cobb fueron divididos aleatoriamente en uno de cuatro tratamientos utilizando un diseño factorial 2 x 2 de la siguiente manera: (1) grupo control (CTRL) que recibió una aplicación oral de gel solo en el DOH en la incubadora antes del transporte y una dieta basal de maíz/harina de soja no medicada; (2) simbiótico de incubadora (HS) que recibió un gel oral que contenía el simbiótico (0.5 mL/pájaro) en la incubadora y la dieta basal; (3) CTRL + simbiótico dietético a 0.5 kg/MT (DS); y (4) HS + simbiótico dietético a 0.5 kg/MT (HSDS). En el día 7 y el día 21, un pájaro por jaula (ocho jaulas replicadas/grupo) fue sacrificado, y el íleon fue inmediatamente extraído para análisis de qPCR. Los datos fueron sometidos a un ANOVA de 2 vías utilizando el procedimiento GLM (JMP Pro17). Se observó una interacción significativa entre la dieta y la incubadora en la relación de conversión alimenticia (FCR) del día 14 al día 21 (p = 0.013) donde los tratamientos HS, DS y HSDS tuvieron un FCR significativamente más bajo en comparación con el CTRL. Sin embargo, no se observó un efecto de interacción significativo en el aumento de peso corporal (BWG) o FCR durante el período experimental general. No se observó una interacción significativa en la abundancia de ARNm de los genes evaluados en el íleon en el día 7 y el día 21. La aplicación de gel con el simbiótico redujo significativamente la abundancia de ARNm del cotransportador de glucosa dependiente de sodio 1 (SGLT1) en el día 7 (p = 0.035) en comparación con los pájaros que recibieron solo gel. Independientemente de la aplicación en la incubadora, la suplementación dietética con simbióticos redujo significativamente la abundancia de ARNm del receptor tipo Toll (TLR)2, TLR4 e interleucina (IL)-10 en el día 7 (p = 0.013). En conclusión, estos hallazgos mostraron que la aplicación de simbióticos en la incubadora y en la dieta podría tener un impacto beneficioso potencial en la inmunidad intestinal de los pollos de engorde al regular la respuesta TLR, un elemento clave de la inmunidad innata. El FCR mejoró del día 14 al día 21 después de la aplicación del simbiótico. Investigaciones futuras que involucren estudios de crecimiento prolongado con un desafío de enfermedad ampliarían las implicaciones de una aplicación temprana de simbióticos.