Este estudio explora métodos para congelar esperma de gato para conservación, utilizando gatos domésticos como modelo para felinos salvajes en peligro de extinción. Probamos dos soluciones de congelación (TEST y Biladyl), diferentes protocolos de adición de glicerol y tratamientos para preparar los espermatozoides para la fertilización in vitro. No se encontraron diferencias significativas en la calidad del esperma (motilidad, integridad del acrosoma) entre las dos soluciones de congelación o los métodos de adición de glicerol. Los porcentajes de motilidad total de los espermatozoides y la integridad del acrosoma se asociaron positivamente antes y después de la congelación. Las tasas de fertilización fueron más bajas en los espermatozoides tratados con Biladyl en comparación con el esperma fresco, mientras que el esperma criopreservado en TEST mostró tasas de fertilización similares a las del esperma fresco. En conclusión, congelar esperma de gato utilizando el diluyente TEST y añadiendo glicerol en un solo paso (lo que puede facilitar el trabajo en el campo) resulta en resultados de fertilización confiables.