El cannabis de tipo droga se multiplica a menudo utilizando métodos de micropropagación para producir cultivos genéticamente uniformes y libres de enfermedades/insectos. Sin embargo, los plantones micropropagados a menudo exhiben variación fenotípica, lo que lleva a un declive en la cultura con el tiempo. En el cannabis, la fuente de estos cambios sigue siendo desconocida, aunque varios factores (por ejemplo, las fuentes de explantes y la cultura in vitro prolongada) pueden resultar en tales variaciones fenotípicas. El estudio presentado aquí evalúa los efectos de las fuentes de explantes (es decir, segmentos nodales derivados de las partes basal, casi basal, media y apical de la planta madre cultivada en invernadero) en múltiples subcultivos (4 subcultivos durante 235 días) sobre los parámetros de multiplicación y las características morfológicas de las hojas de los plantones de cannabis in vitro. Si bien las respuestas iniciales in vitro fueron similares entre los explantes obtenidos de diferentes regiones de la planta, hubo diferencias significativas en el rendimiento a lo largo de múltiples subcultivos. Específicamente, la fuente de explante y/o el número de subcultivos impactaron significativamente la altura de los plantones, el número de nudos y el área de superficie del dosel. Los explantes derivados de las partes basal y casi basal de la planta resultaron en los brotes más altos con el mayor número de nudos, mientras que los explantes derivados de las regiones media y apical llevaron a brotes más cortos con menos nudos. Además, los explantes derivados de la parte basal produjeron plantones de cannabis con hojas más cortas pero más anchas, lo que demostró el potencial de tales explantes para prácticas de rejuvenecimiento in vitro con un mínimo declive en la cultura. Este estudio proporciona nueva evidencia sobre los impactos a largo plazo de la fuente de explante en la micropropagación de cannabis.