La mastitis bovina es una enfermedad significativa que afecta a las vacas lecheras en todo el mundo, principalmente debido a las importantes pérdidas económicas que causa. Entre los patógenos involucrados, spp. ha ganado atención creciente debido al aumento en el número de casos de mastitis prototequial y los desafíos de tratamiento asociados, que a menudo resultan en el sacrificio de los animales afectados. En Chile, solo dos estudios desactualizados de 2011 han reportado infecciones prototequiales en ganado, lo que subraya la necesidad de datos actualizados para comprender la epidemiología de esta infección. Este estudio tuvo como objetivo caracterizar los aislados de vacas lecheras chilenas a través de la identificación molecular a nivel de especie y la evaluación de su diversidad genética, susceptibilidad antimicrobiana y capacidad de formación de biopelículas. Se analizaron un total de 66 aislados de spp., de los cuales 65 fueron identificados como y uno como . El análisis genético reveló 18 genotipos distintos sin agrupamiento por origen de la granja, lo que indica una alta heterogeneidad genética. Todos los aislados mostraron resistencia a la mayoría de los antibióticos probados, excepto a los aminoglucósidos. Además, los aislados demostraron una producción de biopelículas débil a moderada, lo que puede contribuir a la persistencia de las infecciones. Este trabajo representa el primer estudio integral de en Chile y el tercero a nivel mundial en evaluar la diversidad genética, proporcionando valiosos conocimientos para el desarrollo de estrategias terapéuticas alternativas.