El epitelio de la trompa de Falopio humano (hFTE) es el sitio de la fertilización, el desarrollo temprano del embrión y el origen de la mayoría de los cánceres ováricos serosos de alto grado (HGSOCs). Poco se sabe sobre el contenido y las funciones de las pequeñas vesículas extracelulares derivadas de hFTE (sEVs) debido a las limitaciones de los biomateriales y los métodos de cultivo adecuados. Hemos establecido una plataforma microfluídica para cultivar hFTE para la recolección de EV con un rendimiento adecuado para el perfil proteómico basado en espectrometría de masas, y se informaron 295 proteínas comunes de sEV de hFTE por primera vez. Estas proteínas están asociadas con la exocitosis, la degranulación de neutrófilos y la cicatrización de heridas, y algunas son cruciales para los procesos de fertilización. Además, al correlacionar los perfiles de proteínas de sEV con los transcritos de tejido de hFTE caracterizados utilizando GeoMx Cancer Transcriptome Atlas, el análisis de transcriptómica espacial reveló transcritos específicos de tipo celular de hFTE que codifican proteínas de sEV, entre las cuales, FLNA, TUBB, JUP y FLNC se expresaron diferencialmente en células secretoras, las células precursoras de HGSOC. Nuestro estudio proporciona información sobre el establecimiento del perfil proteómico de referencia de las sEV derivadas del tejido de hFTE, y su correlación con los transcritos específicos de linaje de hFTE, que pueden utilizarse para evaluar si la trompa de Falopio cambia su carga de sEV durante la carcinogénesis del cáncer ovárico y el papel de las proteínas de sEV en las funciones reproductivas de la trompa de Falopio.