Este estudio evaluó las características antibacterianas de la interfaz dentina/material y las superficies de dentina expuestas a un cemento de silicato de calcio hidráulico experimental (HCSC) con o sin reemplazo de vidrio bioactivo (BG) (20% o 40%) o mezclado con una solución de nanopartículas de plata (SNP) (1 o 2 mg/mL), y Biodentine, TotalFill BC RRM putty y Material Restaurador Intermedio (IRM). Se evaluaron segmentos de dentina radicular humana con materiales de prueba a 1 o 28 días. En una serie, las muestras se dividieron para exponer las superficies de dentina y material. Se realizó una prueba de contacto directo de 24 h contra biofilms monospecie establecidos durante tres días. En otra serie, la interfaz dentina/material de muestras intactas se expuso a membranas de biofilm durante 3 días y se evaluó la actividad antibacteriana mediante microscopía confocal. La interfaz también fue caracterizada adicionalmente. Todas las superficies de material y dentina de un día fueron antibacterianas. Las superficies de dentina expuestas a HCSC con un reemplazo de 40% de BG, Biodentine e IRM presentaron propiedades antibacterianas disminuidas en comparación con las de los otros cementos. El HCSC mezclado con una solución de SNP de 2 mg/mL tuvo el mayor efecto antimicrobiano en el ensayo confocal. Las características interfaciales de los HCSC fueron similares. Los materiales de prueba conferían actividad antibacteriana a la dentina adyacente. El BG redujo el efecto antibacteriano de la dentina expuesta a HCSC; una solución de SNP de 2 mg/mL aumentó el potencial antibacteriano para períodos de interacción más prolongados (exposición de tres días).