La limpieza cuidadosa de un salón de ordeño y su equipo es fundamental para garantizar una buena calidad de leche cruda, prevenir la diseminación de bacterias y mejorar el bienestar animal. Este estudio tuvo como objetivo investigar, utilizando un ensayo de bioluminiscencia de ATP y análisis bacteriológicos, la contaminación bacteriana de los salones de ordeño en las superficies de los salones de ordeño de las granjas de búfalos en la región de Campania, evaluando la dinámica estacional durante el año 2022. Ocho granjas fueron seleccionadas por el sistema ClassyFarm italiano, que evalúa el nivel de bienestar animal y bioseguridad según el análisis de riesgos. Antes de la toma de muestras, todos los propietarios de granjas lecheras completaron un cuestionario sobre la gestión del ordeño, la higiene animal y la salud. Los cuestionarios evidenciaron procedimientos de limpieza similares, pero una ausencia de un protocolo de limpieza estandarizado entre las diferentes granjas. Los resultados de bioluminiscencia de ATP evidenciaron niveles similares de contaminación en todas las granjas de búfalos seleccionadas, y la comparación estacional no mostró diferencias significativas. Se observó una variación en los porcentajes de aislamientos bacterianos durante las diferentes estaciones, con una mayor prevalencia del 38% en verano. Un pequeño número de muestras mostró ausencia de crecimiento bacteriano. Identificar bacterias es crucial para entender los microorganismos presentes en el salón de ordeño, sin embargo, emplear luminometría de ATP podría ofrecer aplicaciones amplias y precisas en los salones de ordeño de búfalos. En conclusión, el uso de bioluminiscencia de ATP para evaluar la higiene de un salón de ordeño de búfalos podría representar un avance importante en la tecnología de la agricultura lechera.