Los neonicotinoides son pesticidas ampliamente utilizados para el control de plagas en la agricultura con efectos no deseados en los polinizadores. Sin embargo, otros insectos beneficiosos están expuestos a insecticidas que no son letales para ellos, pero pueden acumularse y afectar sus características vitales. El objetivo de este estudio fue determinar los residuos de neonicotinoides en dos tipos de organismos beneficiosos del suelo. El primer grupo incluye a los escarabajos terrestres (familia: Carabidae, orden: Coleoptera). Son importantes en la cadena alimentaria dentro de los ecosistemas existentes, especialmente en áreas agrícolas. El segundo grupo incluye a las lombrices (familia: Lumbricidae, orden: Opisthopora) como humificadores, miembros importantes de la fauna del suelo. La fauna fue recolectada en dos áreas de cultivo de remolacha azucarera en Croacia bajo un manejo intensivo de remolacha azucarera. Los escarabajos terrestres fueron recolectados en seis parcelas de campos de remolacha azucarera tratadas con imidacloprid y tiametoxam o dejadas sin tratar con neonicotinoides. Las lombrices fueron recolectadas en los ocho campos involucrados en la rotación de cultivos de remolacha azucarera de cuatro años (remolacha azucarera, maíz, soja, colza). La detección de residuos de neonicotinoides se realizó mediante LC-MS/MS, método SPE-QuEChERS. El límite de cuantificación (LOQ) fue de 0.001 mg/kg. En los escarabajos terrestres, se detectó la concentración más alta de imidacloprid en 0.027 mg/kg, mientras que los residuos de tiametoxam y clotianidina estaban por debajo del LOQ. La concentración más alta de imidacloprid en las lombrices fue de 0.2141 mg/kg, mientras que los residuos de tiametoxam no superaron los 0.0008 mg/kg. Este es el primer estudio de este tipo en territorio croata y proporciona una valiosa primera visión del estado ecotoxicológico de la fauna beneficiosa del suelo. Se necesitan estudios más completos para evaluar la extensión de la acumulación y tomar medidas adicionales con respecto a programas de conservación para los organismos beneficiosos del suelo.