La alfalfa, un importante cultivo forrajero leguminoso, es valorada por su alto contenido nutricional, su considerable rendimiento, su palatabilidad y su amplia adaptabilidad. La sequía es una de las limitaciones ambientales más significativas para el crecimiento de la alfalfa, particularmente en las regiones kársticas del suroeste de China. En este estudio, realizamos experimentos en macetas para investigar el crecimiento y las respuestas fisiológicas de siete variedades de alfalfa introducidas en la región kárstica de Guizhou bajo condiciones de sequía. Los resultados revelaron que el estrés por sequía redujo notablemente tanto la altura de las plantas como la acumulación de biomasa aérea. Además, bajo estrés por sequía, estas variedades de alfalfa mostraron un aumento en la longitud de las raíces, el área superficial de las raíces y el número de puntas de raíces; actividades enzimáticas protectoras elevadas; y niveles disminuidos de peróxido de hidrógeno (HO) y malondialdehído (MDA), manteniendo así un contenido de agua relativamente más alto. Cada una de las siete variedades mostró mecanismos distintos de adaptación fisiológica y de crecimiento bajo estrés por sequía. Integrando el análisis de componentes principales y el análisis de funciones de membresía, clasificamos la resistencia a la sequía de estas variedades de alfalfa de mayor a menor de la siguiente manera: Crown > WL525 > Colosseo > Victoria > PANGO > Giant 801 > Dimitra. Estos hallazgos proporcionan valiosos conocimientos para la introducción de variedades de alfalfa resistentes a la sequía en las regiones kársticas del suroeste de China y ofrecen orientación para estrategias de cría y cultivo en diversas condiciones ambientales.