En los últimos años, los vesículos extracelulares (EVs), comúnmente denominados exosomas, han ganado prominencia por su potencial como nanotransportadores naturales. Ahora se ha reconocido que las plantas también secretan EVs. A pesar de este descubrimiento, el conocimiento sobre la biogénesis de los EV en cultivos celulares de plantas sigue siendo limitado. En nuestro estudio, hemos aislado y caracterizado meticulosamente los EV de la cultura de callo de la planta modelo. Nuestros hallazgos indican que la abundancia de EV en los callos era menor que en el fluido apoplástico de la planta. Esta diferencia se asoció con la regulación a la baja de la transcripción de los genes del complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte (ESCRT) en las células de los callos. Mientras que el ácido salicílico aumentó la expresión de los componentes de ESCRT, no mejoró la producción de EV. Notablemente, los EV de los callos contenían proteínas esenciales para la biogénesis de la pared celular y mecanismos de defensa, así como microARNs consistentes con los encontrados en plantas intactas. Esto sugiere que los cultivos celulares de plantas podrían servir como una fuente viable de EV que refleje las características de la especie vegetal madre. Sin embargo, se requiere más investigación para determinar las condiciones óptimas para una producción eficiente de EV en estas células cultivadas.