Las topoisomerasas de ADN son las enzimas que regulan la topología del ADN en todas las células vivas. Desde el descubrimiento y purificación de (omega), cuando se identificaron por primera vez las topoisomerasas, se ha examinado la función de muchas de ellas. Sin embargo, su capacidad para relajar el superenrollamiento y desenlazar los precatenanos de moléculas parcialmente replicadas ha recibido poca atención. Aquí, utilizamos electroforesis en gel de agarosa bidimensional para probar la función de tres topoisomerasas de ADN tipo II in vitro: la girasa de ADN procariota, la topoisomerasa IV y la topoisomerasa 2alpha humana. Examinamos la competencia de estas topoisomerasas en un plásmido bacteriano parcialmente replicado: pBR-@AatII, con una horquilla de replicación unidireccional, detenida cuando aproximadamente la mitad del plásmido había sido replicado in vivo. Se aisló ADN de dos cepas: DH5alphaF" y parE10. Estos experimentos nos permitieron evaluar, por primera vez, la eficiencia de las topoisomerasas examinadas para resolver el superenrollamiento y los precatenanos en moléculas parcialmente replicadas y catenanos completamente replicados formados in vivo. Los resultados obtenidos revelaron las funciones preferenciales y también cierta redundancia en las habilidades de estas topoisomerasas de ADN in vitro.