Se prepararon quitooligosacáridos fosforilados (P-COS) utilizando un sistema de disolventes de HPO, PO, EtPO y hexanol. Los P-COS fueron caracterizados por Espectroscopía de Infrarrojo por Transformada de Fourier (FT-IR), Análisis Termogravimétrico-Diferencial (TG-DTA), C NMR, P NMR, análisis de difracción de rayos X, estudios de solubilidad, biocompatibilidad y actividad de fosfatasa alcalina (ALP). Los resultados revelan que la fosforilación ocurrió en las posiciones C y C de los grupos OH y en la posición C del grupo NH. FT-IR confirmó que no hubo descomposición en el anillo de pirano en los P-COS incluso con calentamiento y tratamiento en condiciones ácidas. La naturaleza amorfa de los P-COS fue confirmada por el análisis de difracción de rayos X. Además, se verificaron la biocompatibilidad y la actividad de fosfatasa alcalina de los P-COS contra la línea celular de osteosarcoma MG63 a diferentes concentraciones y no se observó citotoxicidad. Después de 12 h y 24 h de incubación, la actividad de ALP de los P-COS fue mayor en comparación con el grupo de control. Estos resultados sugieren que los P-COS son un material biocompatible y en el futuro podrían abrir una serie de aplicaciones farmacéuticas y clínicas prometedoras para la humanidad.