Las metacaspasas son una clase de proteasas que se encuentran en las plantas y que han ganado atención en los últimos años debido a su participación en la muerte celular programada (PCD) y otros procesos celulares esenciales. Aunque son estructuralmente homólogas a las caspasas que se encuentran en los animales, las metacaspasas tienen propiedades y funciones distintas. Hay nueve genes de metacaspasa en el genoma; estos pueden ser de tipo I o tipo II, y determinar la función de cada miembro de la familia de genes es un desafío. En este estudio, informamos sobre la caracterización de una metacaspasa de tipo II, la metacaspasa-5. Detectamos la expresión de esta solo bajo condiciones específicas, con una fuerte regulación positiva por estrés del retículo endoplásmico y estrés oxidativo en un punto temporal estrecho de 6 horas. La AtMC5 recombinante se purificó con éxito, funcionando de manera óptima a un pH de 7, utilizando un tampón de reacción optimizado que contenía 10 mM de cloruro de calcio junto con un 15% de sacarosa. Al igual que otras metacaspasas, la AtMC5 cortó después del residuo de arginina y demostró una preferencia de sustrato hacia VRPR. Además, se mostró que estaba localizada en el citosol y el núcleo de las células transfectadas. No encontramos evidencia de un vínculo fuerte entre la AtMC5 y la PCD, y los datos proporcionan información adicional sobre la función de las metacaspasas en las plantas y ayudarán en futuras investigaciones para comprender mejor su modo de acción.