La respuesta de espectador inducida por radiación (RIBR) es una respuesta inducida en células no irradiadas que reciben señales de espectador de células directamente irradiadas. Los microhaz de rayos X son herramientas útiles para elucidar los mecanismos subyacentes a la RIBR. Sin embargo, los microhaz de rayos X anteriores utilizaban rayos X suaves de baja energía con efectos biológicos más altos, como los rayos X característicos de aluminio, y la diferencia con los rayos X convencionales y los rayos gamma a menudo ha sido discutida. El sistema de irradiación celular con microhaz de rayos X en el Instituto Central de Investigación de la Industria de Electricidad ha sido mejorado para generar rayos X característicos de titanio de mayor energía (rayos X Ti), que tienen una distancia de penetración más larga suficiente para irradiar tejidos cultivados en 3D. Usando este sistema, irradiamos los núcleos de células HeLa con alta precisión y encontramos que la inducción pan-nuclear de la histona H2AX fosforilada en serina 139 (-H2AX) en las células no irradiadas aumentó 180 y 360 minutos después de la irradiación. Establecimos un nuevo método para evaluar cuantitativamente las células espectadoras, utilizando la intensidad de fluorescencia de -H2AX como indicador. El porcentaje de células espectadoras aumentó significativamente al 23.2% +/- 3.2% y al 29.3% +/- 3.5% a los 180 y 360 minutos después de la irradiación, respectivamente. Nuestro sistema de irradiación y los resultados obtenidos pueden ser útiles para estudios de competencia celular así como para efectos no dirigidos.