La diabetes mellitus tipo 1 (T1DM) es una enfermedad metabólica compleja caracterizada por una pérdida masiva de células productoras de insulina debido a una reacción autoinmune. Actualmente, la única tratamiento efectivo es la administración subcutánea diaria de insulina exógena. Por lo tanto, en los últimos años se ha prestado considerable interés a la terapia con células madre y en particular al uso de cultivos celulares tridimensionales (3D) para reproducir mejor las condiciones in vivo. El objetivo de este estudio es proporcionar un modelo celular fiable que pueda investigarse para aplicaciones de medicina regenerativa para reemplazar las células productoras de insulina en T1DM. Para perseguir este objetivo, creamos un esferoide de co-cultivo de células epiteliales amnióticas (AECs) y células estromales mesenquimales de gelatina de Wharton (WJ-MSCs) en una proporción de uno a uno. Los esferoides resultantes de co-cultivo se analizaron para viabilidad, producción de matriz extracelular y estado hipóxico en cultivos tempranos y a largo plazo. Nuestros resultados sugieren que los esferoides de co-cultivo son estables en cultivo a largo plazo y siguen siendo viables con una producción consistente de matriz extracelular evaluada con tinción de inmunofluorescencia. Estos hallazgos sugieren que este co-cultivo podría potencialmente diferenciarse en células endopancreáticas para aplicaciones de medicina regenerativa en T1DM.